Cellodlingsmedium är näringsbasen för att artificiellt imitera djurcellers in vivo-tillväxtmiljö och upprätthålla överlevnaden och proliferationen av celler in vitro. ett näringsämne. Så vilka är de vanliga problemen man stöter på vid användning av cellodlingsmedium? Låt oss göra en analys.
1. Val av buffertsystem och pH-ändring av cellodlingsmedium
Eftersom det optimala pH-värdet för de flesta celler är mellan 7,0 och 7,4, kan avvikelser från detta intervall ha skadliga effekter på celltillväxt. Men pH-kraven för olika celler är inte exakt desamma. Primära odlade celler har i allmänhet dålig tolerans mot pH-fluktuationer, medan oändliga cellinjer har stark tolerans. Därför är buffertsystemet i odlingsmediet viktigare i den primära kulturen. Det allmänna cellodlingsmediet använder ett balanserat saltsystem, men olika odlingsmedier eller samma serie odlingsmedier använder olika balanserade saltsystem. Till exempel har 199-serierna och MEM-serierna alla Hanks systemkulturmedium och Earles systemkultur. bas. Vissa medier är inte det ovan nämnda konventionella balanserade saltsystemet, såsom RPMI1640 medium, F12 medium. Det balanserade saltsystemet i MEM lågserummediet är inte heller ett konventionellt balanserat saltsystem, och buffringskapaciteten hos det balanserade saltsystemet är starkare än det för det konventionella balanserade saltsystemet.
cell kultur
Det finns många orsaker till pH-fall under cellodling. När cellerna växer mycket snabbt sjunker pH-värdet vanligtvis snabbt, vilket kan lösas genom att passage i tid, öka passageförhållandet eller minska serumvolymen. Dessutom kan för hårt åtdragning av odlingsflaskans lock, otillräcklig buffertkapacitet hos NaHCO3-buffertsystemet, felaktig saltkoncentration i odlingsmediet, bakterie-, jäst- eller svampkontamination också få pH att sjunka ofta snabbt. För närvarande kan du lösa det på följande sätt:
1) Öka NaHCO3-koncentrationen i odlingsmediet eller minska CO2-koncentrationen i inkubatorn. När NaHCO3-halten är mellan 2,0 g/L och 3,7 g/L, är motsvarande CO2-koncentration 5~10 procent;
2) Byt till ett CO2-oberoende odlingsmedium;
3) Lossa locket på flaskan ordentligt. Tillsätt HEPES-buffert till odlingsmediet för att göra slutkoncentrationen 10-25 mM;
4) Använd odlingslösningen baserad på Earles salt i CO2-odlingsmiljön, och använd odlingslösningen framställd av Hanks salt i den atmosfäriska odlingsmiljön;
5) Kassera kultur eller sterilisera med antibiotika om kontaminering är orsaken.
2. Flera viktiga tillsatser används ofta i cellodlingsmedia och problem som bör uppmärksammas i användningsprocessen
Fenolrött används som en indikator på pH i cellodlingsmedia. I allmänhet kan mediets pH-värde bedömas av indikatoreffekten av fenolrött, men innehållet av fenolrött i lågserum eller serumfritt cellodlingsmedium skiljer sig från det i vanligt cellodlingsmedium och kan inte observeras. med blotta ögon eller pH-värdet bestäms empiriskt, och det rekommenderas att använda en pH-mätare för mätning. Fenolrött har vanligtvis ingen signifikant effekt på kvaliteten på biologiska produkter som produceras i seruminnehållande cellodlingsmedia, och kan även avlägsnas genom reningstekniker, men fenolrött kan orsaka intracellulär natrium/kalium-obalans i serumfria cellodlingsmedier påverkar celltillväxten.
cellodlingsplatta
Natriumbikarbonat används huvudsakligen som ett buffertsystem i cellodlingsmedium och har även effekten att reglera osmotiskt tryck. Vanligtvis är den rekommenderade mängden natriumbikarbonat i produktens bruksanvisning en standard och säker mängd, som erhålls baserat på praktisk erfarenhet på vetenskaplig grund. Men på grund av olika cellinjer (stammar) kan samma cell anpassa sig till olika miljöer (olika celltolerans etc.), och det finns regionala skillnader i vattenkvalitet etc. som också kan modifieras något i själva produktionen process, men användningen av De som behöver göra motsvarande tester (fysikalisk-kemiska och cellproduktionstester, etc.).
HEPES är en nonjonisk buffert med god buffringskapacitet i pH-intervallet 7,2 till 7,4, och kan vara giftig för vissa celler vid höga koncentrationer. HEPES-buffert kan användas med låga nivåer av natriumkarbonat (0.34g/L) för att kompensera för ökningen av det osmotiska trycket som orsakas av tillsatsen av ytterligare HEPES. Dess säkra koncentrationsområde är 10 ~ 25 mmol/L.
Natriumpyruvat kan användas som en alternativ kolkälla i cellkultur, och även om celler föredrar glukos som kolkälla, kan celler också metabolisera natriumpyruvat i frånvaro av glukos.
Glutamin är mycket instabil i lösning. Det kan sönderdelas till 50 procent vid 4 grader i 1 vecka. Det är bäst att förbereda det separat vid användning, förvara det i ett -20 graders kylskåp och tillsätt det till cellodlingsmediet före användning.
