Cellodlingsplattor används ofta och är viktiga förbrukningsmaterial i cellodlingsexperiment eftersom de kan spara tid och reagensmaterial för cellexperiment och kan ställa in flera dynamiska variabler samtidigt för att underlätta observation och detektion.
odlingsplatta
1. Locken på 96, 24-brunnsodlingsplattor eller petriskålar är mycket lösa, vilket är bekvämt för ventilation, men kommer bakterier, mögel och andra föroreningar också att glida in?
Svar: (1) Omslaget är mycket löst och tillhör halvöppen kultur. Syftet med detta är att andas (faktiskt för att CO2 utanför odlingsskålen ska kunna bytas ut fullt ut med odlingsskålen för att bibehålla mediets pH-värde).
(2) Det finns fördelar och nackdelar, vilket ökar risken för föroreningar. Dessutom gör detta att vätskan i petriskålen avdunstar, vilket är anmärkningsvärt för exakt dosering av läkemedel. Så följande två åtgärder är nödvändiga:
a) Luften i inkubatorn måste vara ren (vanligt ultraviolett ljus, alkoholskrubbning, och inkubatorn ska vara på och av så lite som möjligt)
b) Fuktigheten i inkubatorn måste hållas på 100 procent hela tiden (en diskho där sterilt destillerat vatten placeras i inkubatorn). Var uppmärksam på aseptisk operation!
2. Mina celler inokuleras på odlingsplattan, och cellerna samlas alltid i den perifera delen. Vad ska jag göra? Jag ser att cellerna hos några vapenkamrater är samlade i mitten. Är det ett problem med kvaliteten på plattan?
A: Hur blandar du dina celler? Blåser det pipett eller skakar odlingsplattan? Om det är det senare, och det skakas i en cirkel, är det mycket troligt att cellerna kommer att kastas till den omgivande delen på grund av centrifugalkraften, vilket resulterar i mitten av cellerna. Mindre, mer än fyra veckor! Du kan prova själv!
Ett bra sätt: innan du odlar fröplattan, sätt in odlingsplattan i inkubatorn för några timmars mättnad och ta sedan ut den. Vid sådd av cellerna ska kraften vara lätt. Du kan använda en droppare på sidan av odlingsplattans hål. Tillsätt långsamt för att låta cellsuspensionen rinna in i brunnarna på plattan, och de odlade cellerna växer i stort sett jämnt. Kom ihåg att aldrig skaka oscillatorn, annars kommer dina celler att klumpa ihop sig som du sa.
3. Mina celler passerar normalt, men när en typ går in i en platta med sex brunnar (oavsett läkemedelstillsats och kontroll), finns det alltid två eller tre brunnar (slumpmässiga) celler som inte växer bra, är små och verkar att vara trasig. Har någon stött på detta? Vad är anledningen?
S: Det kan vara relaterat till temperaturen på vätskan du tillsätter. Om dina celler precis har tagits ut för att byta medium och lägga till mediet, och mediet också tas ut ur 4 graders kylen snart, är det lätt att cellerna fryser ihjäl. Det rekommenderas att du bäst inkuberar mediet i inkubatorn i 15 minuter först.
Dessutom är det också relaterat till tillväxttillståndet för dina celler. Celler före dosering kan inkuberas med höga serumkoncentrationer. Se till att cellerna är i gott skick.
Eller det kan inkuberas i ett 37-gradigt vattenbad, eller problemet med själva odlingsplattan, du kan prova en annan odlingsplatta. En annan möjlighet är celltillståndsproblemet, justera serumkoncentrationen när plattan sås.
4. De senaste dagarna använde jag en odlingsplatta med sex brunnar för att ympa celler. Efter odling i 24 timmar bytte jag medium. Innan jag bytte medium observerade jag att cellerna fäste vid väggen och tillståndet var mycket bra. Efter att ha bytt medium använde jag mikroskopet direkt. Det observerades att nästan hälften av cellerna i varje brunn visade ett nära-dödstillstånd. Cellerna blir väldigt små och producerar mycket skräp, medan den andra halvan av cellerna är normala, det finns en vattendelare mellan onormala celler och normala celler, den övre halvcirkeln är bra, den nedre halvcirkeln är inte bra, hur är detta? Vad är problemet?
S: Du kan se om det finns något av följande skäl
a. Odlingsplattan är inte placerad horisontellt;
b. Vad sägs om ditt odlingsmedium, om odlingsmediet går ut kommer cellerna inte att fästa. Prova ett nylagat medium
c. Det kan vara problemet med plattan. Det är inga problem att byta tallrik av ett annat märke eller använda kulturflaskan.
d. Har du varit uppmärksam på fläktens påverkan vid byte av medium, speciellt när det är många odlingsplattor som behöver bytas ut, är det lätt att få cellerna att krympa och spricka på grund av vind- och vattenförlust. Om så är fallet bör mediet bytas en efter en, och var inte rädd för att slösa pipetten, var uppmärksam på effektiviteten av operationen!
5. Det har gått fyra dagar sedan cellerna smältes och inokulerades i en 24-brunnsplatta, och mitten av varje brunn var alltid full. Mediet tvättades med PBS varje dag, och samma situation inträffade när mediet byttes nästa dag. Kanterna är väl långa och mitten är fullt av döda celler?
Svar: Om cellerna är täta runt och glesa i mitten finns det ungefär följande orsaker:
Mediet tillsattes för lite. Främst på grund av problemet med vätskespänning.
Om det finns mindre vatten i botten av inkubatorn;
Skakningarna efter cellsådd var för mycket. Cellerna är fördelade runt på grund av centrifugalkraften.
Nyckeln till om cellerna är jämnt fördelade är att varje typ av cell har individuella skillnader, och andras celloperationer kanske inte passar dig. Så du måste utforska på egen hand och hitta en uppsättning regler som är unika för dina egna celler. Du har följande erfarenhet:
(1) Alla cellsuspensioner som ska ympas måste blandas med en pipett före sådd.
(2) Enligt uppgifterna är vätskevolymen i 24-brunnsplattan 1 ml, i själva verket är volymen 1 ml tillräckligt.
(3) Vid inokulering, tillsätt provet långsamt och kom ihåg att rotera pipettspetsen något. Provet kan inte tillsättas för snabbt för att undvika att celler ackumuleras vid en provtillsatspunkt, och var uppmärksam på att lägga till prover i olika delar, det vill säga medan du lägger till den rörliga pistolen. Huvudet, på konstgjord väg gör att cellerna tenderar att vara jämnt fördelade. Om du gör det har effekten att cellerna fördelas jämnt.
