PCR-detektion
Polymeraskedjereaktion (PCR) använder en bit DNA som mall, och med deltagande av DNA-polymeras och nukleotidsubstrat amplifieras DNA:t till en tillräcklig mängd för strukturell och funktionell analys. PCR-detektionsmetoden har extremt viktig betydelse vid klinisk snabb diagnostik av bakteriella infektionssjukdomar.
PCR-principen används för att amplifiera ett DNA-fragment som är beläget mellan två kända sekvenser, liknande replikeringsprocessen av naturligt DNA. DNA-molekylen som ska amplifieras används som mall, och ett par oligonukleotidfragment som är komplementära till 5'änden och 3'änden av mallen används som primrar. Under verkan av DNA-polymeraset följer det mallen enligt den halvreserverade replikationsmekanismen. Kedjeförlängning tills slutförandet av ny DNA-syntes, upprepa denna process, mål-DNA-fragmentet kan amplifieras.
(PCR) är en metod för enzymatisk syntetisering av specifika DNA-fragment in vitro. Den består av flera steg av högtemperaturdenaturering, lågtemperaturglödgning och lämplig temperaturförlängning. Funktioner som hög känslighet, enkel användning och tidsbesparing. Det kan användas inte bara i grundforskning som genisolering, kloning och nukleinsyrasekvensanalys, utan också vid diagnos av sjukdomar eller någon plats där det finns DNA och RNA. Polymeraskedjereaktion (Polymerase Chain Reaction, förkortat PCR) är också känd som cellfri molekylär kloning eller specifik DNA-sekvens in vitro primer-riktad enzymatisk amplifieringsteknologi.
Den semi-reserverade replikeringen av DNA är ett viktigt sätt för biologisk evolution och passage. Dubbelsträngat DNA kan denatureras och smältas till en enkelsträng under inverkan av en mängd olika enzymer. Med deltagande av DNA-polymeras och en promotor kan det dubbelsträngade DNA:t replikeras till samma två molekyler enligt principen om komplementär basparning. I experiment fann man att DNA även kan denatureras och smältas vid höga temperaturer, och det kan omnatureras till dubbelsträngar igen när temperaturen sänks. Därför, genom att kontrollera denatureringen och renatureringen av DNA genom temperaturförändringar, och designa primers som promotorer, kan tillägg av DNA-polymeras och dNTP fullborda in vitro-replikeringen av specifika gener.
Den enkla poängen är att använda specialutrustning, använda dNTPS, Mg2+, specifika primrar, DNA-polymeras och buffertsystem, lägga till mall, som är DNA-provet för in vitro-amplifiering, och utföra elektrofores. Om den kan amplifieras och storleken på den amplifierade produkten överensstämmer med målbandet, betyder det att primern och mallen är specifika och detektionsindexet är positivt.
PCR-nukleinsyradetektionsmetoder och steg
Nukleinsyratestning kräver fem steg: provtagning, provretention, retention, nukleinsyraextraktion och datortestning.
Nukleinsyradetektering
Det första steget är att samla upp mänskliga sekret och torka av näshålan eller bakväggen i svalget och bilaterala svalgmandlar med ett nästest eller ett svalgtest.
I det andra steget behöll den medicinska personalen provet, sänkte ner provstyckets huvud i cellkonserveringslösningen och skruvade på rörlocket omedelbart efter att svansen brutits.
I den tredje delen, lägg provet i en lufttät påse, förvara det och skicka det för inspektion i tid.
Det fjärde steget är att skicka provet till laboratoriet för att extrahera nukleinsyra.
I det femte steget utsätts extraktet för en fluorescerande PCR-amplifieringsreaktion.
Behöver även lite förbrukningsmaterial och instrument
PCR-instrument, PCR-rör, pipettspets, djupbrunnsplatta, behållare och reagenser tillsatta
