Några tips för cellkultur i laboratoriet

Våra operationsmetoder, detaljer och teoretiska förklaringar kommer att bli riktlinjerna för din operation, såsom placering av näringslösningar och cellflaskor; steriliseringsprocedurer; För att lära sig deras korrekta funktion är det nödvändigt att uppmärksamma dem första gången.

Vårda celler som att uppfostra barn

Celler är verkligen ömtåliga. Det är bäst att kontrollera det varje dag för att förhindra onormala fenomen som brist på vatten, koldioxid, strömavbrott och otillräcklig temperatur i inkubatorn. Det är också nödvändigt att lösa dessa olyckor i tid för att undvika större smärta orsakad av upprepade experiment. .

Bra celler bör sås i tid

Celler passeras i omgångar så att även om en batch misslyckas finns det en reserv. Det kanske inte är lätt för den genomsnittliga personen som den senare. Men detta är lärdomen av mitt blod. När cellerna väl var förorenade utplånades hela armén. På den tiden ångrar jag att jag inte skyddade fröet.

Varje cell har sina egna egenskaper och bör behandlas olika.

Celler är samma som människor, och olika celler har olika kulturegenskaper. Var försiktig i odlingsprocessen. Olika cellinjer använder olika media och serum.

Till exempel är de glatta muskelcellerna jag höjer väldigt aktiva och gillar att vara livliga. Om 2-3 dagar kommer det att finnas en stor befolkning, och jag gillar inte att äta och dricka särskilt mycket. Det är verkligen det bästa barnet att uppfostra. Endotelceller och glatta muskelceller har liknande personligheter, men de är väldigt ohygieniska och slarviga. Det finns många sekretoriska celler i dem, så de måste bytas ut och tvättas ofta. RAW264.7-cellerna är också mycket glada och mycket ätbara. Det är nödvändigt att mata dem ofta. Huvudvärken är att cellerna lätt aktiveras. Det är bra att flaskan och miljön som de odlas i är fria från endotoxiner, men det är svårt för mig som mamma att tillfredsställa dem.

Förbereder för arbete innan träning

Inklusive hantering av förbrukningsvaror, konfiguration av reagenser, sterilitetstestning m.m.

Rengöring av glas. För glasvaror (cellflaska, flaska innehållande näringslösning, liten penicillinflaska etc.), använd först tvättpulver för att rengöra (var uppmärksam på döda hörn) och skölj sedan. Blötlägg i sur lösning i mer än 24 timmar, skölj sedan med rent vatten 10 gånger för att avlägsna kvarvarande syralösning. Flaskor etc. skakas kraftigt under sköljningen. Blöts sedan i dubbeldestillerat vatten i 24 timmar. Efter torkning, slå in den och torka den i 160 grader i 2 timmar.

Reagenskonfiguration. Som vätska för cellodling kan i allmänhet mer än dubbeldestillerat vatten användas. Och var uppmärksam på justeringen av pH-värdet.

Sterilitetstestning. Använd främst filtersterilisering: som trypsin, antibiotika, G-418-lösning, olika medier, natriumpyruvat, glutamin, etc. Vissa kan autoklaveras: PBS, D-Hank's, etc.

Reagenser lagras i alikvoter

Inklusive näringslösning, pankreatin, serum, etc.

Serum är särskilt viktigt. Serum måste förvaras i -20 grad. Om en flaska inte kan användas åt gången kan 40-50ml dispenseras i sterila syrabehandlade flaskor eller till och med förvaras i penicillinflaskor. I allmänhet är serumet som tillhandahålls av tillverkaren sterilt och kräver inte sterilfiltrering. Om det finns mycket suspenderat material i serumet kan serumet tillsättas i mediet och filtreras tillsammans, och serumet ska inte filtreras direkt. (Ingen effekt på cellodling under normala omständigheter)

Det flaska serumet måste tinas gradvis: 4 graders kylskåp är helt upplöst och delas sedan upp i förpackningar. Under upplösningsprocessen måste den skakas regelbundet (var noga med att inte orsaka luftbubblor) för att göra temperaturen och sammansättningen enhetlig och minska förekomsten av nederbörd. Tina inte direkt från –20 grader till 37 grader, eftersom temperaturen ändras för mycket, vilket lätt kan orsaka proteinkoagulering och utfällning.

Värmeinaktivering avser att värma upp det helt tinade serumet vid 56 grader i 30 minuter. Efter att vattenbadet stigit till 56 grader, lägg i serumet, vänta tills temperaturen stiger till 56 grader och räkna tiden, skaka det vanligtvis jämnt en gång var 5:e minut eller så. Syftet med denna värmebehandling är att deaktivera komplementkomponenterna i serumet. Om det inte är nödvändigt utförs denna värmebehandling i allmänhet inte eftersom den kommer att orsaka en betydande ökning av sediment och påverka serumets kvalitet. Var uppmärksam på effekten av att byta serum (inklusive olika batcher) på cellerna.

Stark känsla av sterilitet

Före experimentet steriliserades den ultrarena bänken med UV-ljusbestrålning i 30 minuter, den aseptiska operationsytan torkades med 70 procent etanol och den ultrarena bänkfläkten slogs på i några minuter innan den experimentella operationen startade .

För att lära dig mer om laboratoriecellodling, klicka på: http://www.shjasw.com/