Det finns ofta problem av ett eller annat slag i cellodlingsprocessen. Underskatta inte cellodling, men den innehåller universitetsfrågor. Genom att kommunicera med användare hittar du många problem som kan undvikas. Följande är vanliga i processen med cellodling. Analysera orsaken till avvikelsen.
petriskål
1. Odlade celler fäster inte vid väggen
möjlig orsak
1. Överdriven trypsin nedbrytning;
2. Mykoplasmakontamination;
3. Mediets pH-värde är för alkaliskt (NaHCO3-nedbrytning);
4. Cellåldring;
5. Den initiala koncentrationen av inokulerade celler är för låg eller för hög.
Lösning
1. Förkorta trypsinsmältningstiden eller minska trypsinkoncentrationen;
2. Isolera kulturen och detektera mykoplasma. Rengör stativet eller inkubatorn. Om mykoplasmakontamination hittas, kassera kulturen;
3. Använd steril ättiksyralösning för att justera pH eller fyll på med steril CO2;
4. Aktivera nya konserveringsceller;
5. Justera den optimala inokulerade cellkoncentrationen.
2. Klustring av suspensionsceller
möjlig orsak
1. Odlingsmediet innehåller kalcium- och magnesiumjoner;
2. Mykoplasmakontamination;
3. Översmältning av proteas orsakar cellys;
4. DNA-kontaminering.
Lösning
1. Tvätta cellerna med kalcium- och magnesiumfri balanserad saltlösning och blås försiktigt och sug
2. Cellerna erhåller en enda cellsuspension;
3. Separera kulturen och detektera mykoplasma;
4. DNaselbehandling av celler.
3. Odlade celler växer långsamt
möjlig orsak
1. På grund av utbyte av olika odlingsmedium eller serum;
2. Vissa komponenter som är nödvändiga för celltillväxt i odlingsmediet, såsom glutamin eller tillväxtfaktorer, är utarmade eller saknas eller har förstörts;
3. Det finns en liten mängd bakteriell eller svampförorening i kulturen;
4. Felaktig förvaring av reagenser;
5. Den initiala koncentrationen av inokulerade celler är för låg;
6. Celler har åldrats;
7. Mykoplasmakontamination.
Lösning
1. Jämför sammansättningen av det nya mediet och det ursprungliga mediet, jämför det nya serumet och det gamla serumet för att stödja celltillväxtexperiment och låt cellerna gradvis anpassa sig till det nya mediet;
2. Byt till nyberedd odlingsmedium eller tillsätt glutamin och tillväxtfaktorer;
3. Använd antibiotikafritt odlingsmedium för odling, om det visar sig vara kontaminerat, kassera odlingen;
4. Serum bör förvaras vid -10 till -20 grad. Odlingsmediet bör förvaras i 2-8 grad i mörker. Det seruminnehållande kompletta odlingsmediet ska förvaras i 2-8 grad och ska användas inom 1 vecka;
5. Öka den initiala koncentrationen av inokulerade celler;
6. Byt till en ny konserveringscell;
7. Isolera kulturen och detektera mykoplasma. Rengör stativet och inkubatorn. Om mykoplasmakontamination hittas, kassera kulturen.
För det fjärde växer de odlade cellerna dåligt
möjlig orsak
A. Tillståndet för själva cellen
1. Antalet cellpassager är stort, och cellerna åldras;
2. Cellympningsmängd: för låg inokuleringsmängd, långsam celltillväxt;
3. Passage av celler är för sent: cellförgiftning, som påverkar tillväxten av celler efter passage;
4. Trypsinuppslutningstiden är för lång eller för kort: om tiden är för lång dör cellerna; om tiden är för kort är cellerna inte helt separerade i kluster, och cellerna dör;
5. Kryokonservering och återhämtning av celler: långsam frysning och omedelbar lysering.
B. Föroreningar
1. Mykoplasmakontamination;
2. Mögelförorening.
C, odlingsmedium eller serum
1. Ingen validering före serum- eller mediumersättning;
2. Huruvida det valda mediet är lämpligt;
3. Huruvida mediumberedningen är lämplig;
4. Om mediumberedningen är korrekt.
D. att odla miljön
1. Är tillgången på CO2 normal?
2. Temperaturen på inkubatorn eller shakern är korrekt kontrollerad.
Lösning
Gör riktade lösningar enligt ovanstående fyra möjliga skäl
1. Var uppmärksam på tillståndet hos cellerna: såsom antalet passager, mängden inokulering, etc.;
2. Undvik föroreningar (använd vanligt, lagligt och spårbart serum);
3. Använd lämpligt serum eller medium, helst verifierat;
4. Var uppmärksam på laboratoriemiljön.
Möjliga orsaker till celldöd i kultur
1. Det finns ingen CO2 i inkubatorn;
2. Temperaturen i inkubatorn fluktuerar för mycket;
3. Celler skadas under kryokonservering eller återhämtning;
4. Odlingsmediets osmotiska tryck är felaktigt;
5. Ansamling av toxiska metaboliter i odlingsmediet.
Lösning
1. Detektera CO2 i inkubatorn;
2. Kontrollera temperaturen i inkubatorn;
3. Ta en ny bevarad cellart;
4. Detektera det osmotiska trycket hos odlingsmediet;
5. Byt till färskt odlingsmedium;
